Ancak bazı durumlarda Western blotlama için serum kullanılması gerekli veya avantajlı olabilir. Örneğin, ilgilenilen protein saflaştırılmış protein numunesinde düşük miktarda mevcutsa serum kullanılması proteinin tespit edilme şansını artırabilir. Ek olarak serum, protein-protein etkileşimlerini incelemek veya belirli proteinlere karşı antikorları tespit etmek için kullanılabilir.
Western blotlama için serumun kullanılması gerekiyorsa, girişim ve arka plan sinyali potansiyelini en aza indirecek adımların atılması önemlidir. Bu adımlar şunları içerebilir:
* Hücresel artıkları ve çözünmeyen parçacıkları uzaklaştırmak için serum örneğinin santrifüj yoluyla hazırlanması.
* Müdahale eden maddelerin konsantrasyonunu azaltmak için serum numunesinin seyreltilmesi.
* Spesifik olmayan etkileşimleri en aza indirmek için sığır serum albümini (BSA) gibi bir bloke edici ajanın kullanılması.
* Arka plan sinyalini azaltmak için antikor konsantrasyonları ve inkübasyon süreleri gibi Western blot koşullarının optimize edilmesi.
Genel olarak, girişim ve arka plan sinyali potansiyeli nedeniyle Western blotlama için serum kullanılması genellikle önerilmese de, bazı durumlarda gerekli veya avantajlı olabilir. Serum kullanılırken Western blot koşullarının dikkatli bir şekilde optimize edilmesi önemlidir.