Hedef:
Bu deneyin amacı, enzimler kullanılarak nişasta sindirimi sürecini gözlemlemek ve incelemek ve zaman içinde nişasta varlığında meydana gelen değişiklikleri izlemektir.
Malzemeler:
- 2 test tüpü
- 37°C'ye (vücut sıcaklığı) ayarlanmış su banyosu veya ısıtma bloğu
- İyot çözeltisi (seyreltilmiş)
- Benedict'in çözümü
- Nişasta çözeltisi (%1)
- Tükürük amilaz enzimi (sıvı formda)
- pH gösterge şeritleri
- Kronometre veya zamanlayıcı
- Damlalık
- Güvenlik gözlükleri
Prosedür:
1. Test Tüpünün Hazırlanması:
- Bir test tüpünü "Kontrol", diğerini ise "Enzim" olarak etiketleyin.
2. Kontrol Kurulumu:
- "Kontrol" test tüpüne 5 ml nişasta çözeltisi ekleyin.
- Daha sonra "Kontrol" test tüpüne 5 ml su ekleyin.
- "Kontrol" test tüpünün içeriğini yavaşça karıştırın.
3. Enzim Kurulumu:
- "Enzim" test tüpüne 5 ml nişasta çözeltisi ekleyin.
- "Enzim" test tüpüne 5 ml tükürük amilaz enzimi ekleyin.
- "Enzim" test tüpünün içeriğini yavaşça karıştırın.
4. Kuluçka:
- Hem "Kontrol" hem de "Enzim" test tüplerini 37°C'ye ayarlanmış su banyosuna veya ısıtma bloğuna yerleştirin.
- Tutarlı bir sıcaklığı korumak için test tüplerinin suya batırıldığından emin olun.
5. Zaman Aralıkları:
- Test tüplerini belirli zaman aralıklarında su banyosunda bırakın:0 dakika (başlangıç durumu), 5 dakika, 10 dakika ve 15 dakika.
6. Nişasta Testi:
- Her zaman aralığında "Enzim" ve "Kontrol" test tüplerini su banyosundan çıkarın.
- Her test tüpüne 2-3 damla seyreltilmiş iyot çözeltisi ekleyin.
- Her iki test tüpündeki renk değişikliklerini gözlemleyin.
- İyot, nişasta varlığında mavi-siyaha döner.
7. Glikoz Testi:
- Her zaman aralığında "Enzim" ve "Kontrol" test tüplerini su banyosundan çıkarın.
- Her test tüpüne 5 damla Benedict solüsyonu ekleyin.
- Test tüplerini kaynar su banyosunda 2-3 dakika bekletin.
- Her iki test tüpündeki renk değişikliklerini gözlemleyin.
- Benedict çözeltisi, artan glikoz konsantrasyonlarında yeşile, sarıya, turuncuya veya kırmızıya döner.
8. pH İzleme:
- Her zaman aralığında "Enzim" ve "Kontrol" test tüplerini su banyosundan çıkarın.
- Her test tüpündeki çözeltilerin pH'ını ölçmek için bir pH gösterge şeridi kullanın.
9. Not Gözlemleri:
- Her zaman aralığında her iki test tüpündeki gözlemleri ve renk değişikliklerini kaydedin.
10. Denemeyi tekrarlayın:
- Birden fazla veri noktası elde etmek ve sonuçlarda tutarlılık sağlamak için deneyi tekrarlayın.
Beklenen Sonuçlar:
- "Kontrol" test tüpünde, iyot çözeltisi deney boyunca mavi-siyah kalacaktır, bu da nişastanın varlığını gösterir. Benedict'in çözeltisi "Kontrol" test tüpünde mavi kalacak ve bu da glikozun olmadığını gösterecektir. "Kontrol" test tüpünün pH'ı nispeten stabil kalmalıdır.
- "Enzim" test tüpünde, iyot çözeltisi zamanla mavi-siyah rengini yavaş yavaş kaybedecektir, bu da nişastanın tükürük amilaz enzimi tarafından parçalandığını gösterir. Zaman geçtikçe çözüm daha netleşecek veya daha açık bir renge dönüşecektir. Benedict'in çözeltisinin rengi yeşil, sarı, turuncu veya kırmızıya dönüşecek ve bu, nişasta sindirimi tarafından üretilen glikozun varlığını gösterecektir. "Enzim" test tüpünün pH'ı, sindirim sırasında asit üretimi nedeniyle bir miktar düşebilir.
Sonuç:
Deney, tükürük amilazı enzimi tarafından nişasta sindirimi sürecini göstermektedir. İyot ve Benedict çözeltisinin varlığında renk değişikliklerini gözlemleyerek nişastanın glikoza dönüşümünü takip edebiliriz. PH değişikliklerinin izlenmesi, sindirim sırasında meydana gelen kimyasal değişikliklere ilişkin ek bilgiler sağlar. Bu deney, enzim-substrat etkileşimlerinin temel prensiplerini ve enzimlerin karmaşık karbonhidratları daha basit şekerlere parçalamadaki rolünü vurgulamaktadır.