antikorlar proteinler biotin bağlamak için teknisyenleri pH 9 sodyum bikarbonat ( NaHC03 ) kullanmak , bir antijenvücuda girdiğinde üretmek ; dimetilsülfoksit ( DMSO ) ;
NHS Biotin - ve PBS adı verilen bir tuz madde. Numuneler , daha sonra DMSO içinde NHS -biotin ilave edilir , sodyum bikarbonat ile karıştırılır. Çözelti daha sonra analiz antikorlar ilave edildi ve dört saat oda sıcaklığında gece boyunca ya da 39.2 derece Fahrenheit için bir rotator denilen bir ekipman parçası üzerinde inkübe edilir. Son olarak, PBS çözeltisi ile seyreltilir.
Hücre yüzey biyotinilasyonu
hücre yüzeyi biyotinilasyon protokolde , teknisyen doku kültürü , fosfat tamponlu salin (PBS) de kullanmak pH 7.4 sülfosükinimidil -2-( biyotinamido ) etil-1 ,3 - ditiyopropiyonat tampon çözeltisi Science.The hücreleri, biotin ve tampon çözeltisi ile karıştırılır ve santrifüje tabi tutulur boşaltıldı Protein in Current Protocols göre , amino grupları ihtiva eden ve TrisCI asitlik dengelemek . Katı içeriği ve daha sonra spesifik proteinlerin , bir jel elektroforez plaka üzerinde analiz edilmiştir. Peptitler
Biyotinilasyon
peptitlerin biyotinilasyonunu gerçekleştirmek için kullanılan reaktif NHS'dir Biotin -SS , Philip Shepherd göre, " Monoklonal Antikorlar : . Pratik Bir Yaklaşım " Peptidler amino asitlerin kısa fragmanları, proteinler ve DNA oluşturan moleküllerdir. Bu protokolde, ticari çözelti NHS -SS Biotin su içinde çözülür. Daha sonra peptit Örnek birlikte asit veya pH dengelemek için sodyum bikarbonat ile , buna ilave edilir. Çözelti daha sonra , iki saat süre ile buz üzerinde inkübe edilir. Teknisyenlerbiyotin molekülleri ile veya olmadanörnek izleyebilirsiniz .