a ve kapsid lipid zarf içinde kapsüllenmiştir bir RNA genomu içeren retrovirüsler bulaştırmak konakçı hücrelerin zarlarında reseptörlerine onları bağlantı yardımcı polipeptid zincirleri ihtiva ederler. En hücrelerin kalıtsal bilgiler DNA'daki Oysa , bu retrovirüslerin RNA içerdiği ; retrovirüsler de enzim bunları host DNA'ya bağlı sağlayan, ters transkriptaz taşır. Bazı protokoller bu virüsDNA hücreninmaksatlı enfeksiyonunda laboratuvarlar tarafından takip edilmektedir . Laboratuar
belirli laboratuar ekipmanı ve malzemeleri hazırlama retroviral enfeksiyon sürecine yardımcı olmak için gereklidir. Ekipman 1 pipet yardımı , 1 pipet - man , 1 doku kültürü kaputu , 37 derece santigrat ve 32 derece santigrat kuluçka ve bir Eppendorf santrifüj içerir . Malzemeler doku kültürü plakaları , tek kullanımlık bir Pasteur pipeti , nitelikli retroviral süpernatan , filtre - sterilize polybrene ve filtre ile sterilize protamin sülfat bulunmaktadır.
Enfeksiyon içinHücre hazırlanması
Önceki enfeksiyon , hedef hücreler , bir doku kültürü plakasında bölünmüş olması ve beş yüzde CO2 ile 37 santigrat derecelik bir inkübatör içinde gece boyunca inkübe edildi. Kuluçka döneminin amacı, % 50 konfluent hücreler yaratmaktır. Hücrelerin hazırlanması daha önce hücreler enfeksiyon süreci için optimize edilmiş olduğundan emin olmak için gereklidir. Stanford Üniversitesi'ndeNolan Lab hücre enfeksiyon hertestinsonuçlarını optimize etmek içinNIH 3T3 hücrelerini enfekte başlangıç başlar önerir .
sonra , araştırmacılarhücreleri sağlıklı vedoğru izdiham hem emin olmalıdır . Doku kültürü kapağı kullanarak, hücresel madde aspire edilir ve bir viral supernatant hücrelere uygulanır. Bir kez uygulanan ,plaka nazikçe eşit dağılımını sağlamak için ileri ve geri sarsıldı olmalıdır . Hücreler daha sonra santrifüj ile aşılanmışEppendorf santrifüj içinde yerleştirerek ve 30 derece Celsius bir sıcaklıkta doksan dakika boyunca 2,500 rpm'de bunları iplik olmalıdır. Daha sonra, hücreler, 1-2 gün boyunca 32 santigrat derecede inkübe edilmelidir. Virüs daha sonra ekstre edilen hücrelerin ile değiştirilir ve ilk enfeksiyondan sonra üç ila yedi gün arasında herhangi bir analiz edilecek inkübatör içine yerleştirilir.