Bu tedavisi sırasında , teknisyen protokole uygun olarak , pH 7.4 , sodyum klorür, merkaptoetanol ( ME) ve etilendiamintetraasetik asit (EDTA) çözeltisi ile de Atris polimer amiloz reçine 20 ml yıkama Çevrimiçi . Hücre numuneleri , ilave santrifüje tabi tutulur ve jel elektroforezi ile analiz edilmiştir . Örnekler ayrıca .
Küçük Ölçekli MBP - füzyon protein saflaştırma
görekromatografi kolonu boyunca geçerken teknisyenleri çözeltinin bileşenleri elüat ya da gözlemlemek bir kromatografya , analiz edilir Kudüs İbrani Üniversitesi, biyologlar 39.2 derece Fahrenheit dakikada 8000 devir ile 10 dakika boyuncareaktif izopropil BD- 1 - tiogalaktopiranosid (IPTG ) , spin hücre kültürü kullanın. Daha sonra, süpernatan sıvı boşaltılır ve birkaç tüplere ayrıldı ve tekrar santrifüje tabi tutulur , numune , soğuk PBS tampon karıştırın. Numuneler daha sonra posterior analiz için -112 derece Fahrenheit tutulur .
Maltoz Binding Protein Fusion Tag Arıtma
Affinity etiketler genetik moleküler biyoloji istihdam molekülleri tasarlanmıştır proteinleri tespit etmek ve saflaştırmak için . Bu protokol Polihistidin protein marker ( HisMBP ) yapımını içeren üç aşamadan ayrılmıştır prosedürlerin karmaşık bir kümesidir ; Proteinin çözünürlüğünü değerlendirmek için bir pilot deneme ; ve Nature protokole uygun olarak MBP moleküllerin büyük ölçekli saflaştırma , . Yanı sıra, E. coli örneklerinden , teknisyen ampisilin kullanımı , kanamisin, IPTG , anhydrotetracycline , glikoz monohidrat , hücre liziz tamponu, DNA polimeraz , PCR primerleri , Tris -asetat -EDTA ve etidyum bromür .