HPLC tekniğinin dört ana bileşenleri içerir . Polarite molekülleri ayırmak için sistem yeteneğini etkileyen İlk olarak , kolon boyuncanumune taşıyan çözücü dağıtım sistemi ( mobil faz) , önemlidir. Sütun kromatografi , genellikle bir yüzerme maddesi ile dolu bir dikey cam sütundur. İkinci olarak, ( aynı zamanda hareket etmez , çünkü , durağan faz olarak da bilinir) yaygın olarak yüzerme maddesi , silika jeli ya da alümina olup . Üçüncü olarak, örnek giriş sistemi , çözücü dağıtım sistemi içine analiz edilecek numunenin tanıtmak için enjeksiyon ağzından bir çeşit oluşur. Dördüncü bileşendedektörü olduğunu .
Dedektörler
kullanılan dedektörtipi numuneteknisyenleri izole etmeye çalışıyoruz ne molekülleri çalıştıran ve türüne bağlıdır . Bir dedektörü seçerkenteknisyen kullandığıkriterler seçicilik , sinyal- gürültü oranı , algılama sınırı , doğrusal aralığı , zaman sabiti , sürüklenme ve hücre hacmi içerir. Yaygın olarak kullanılan dedektörler morötesi - görünür dedektörleri, kütle spektrometresi , refraktif indeksleri , floresan dedektörleri veya evaporatif ışık saçılması cihazları bulunmaktadır .
Prosedür
,dedektör açın (sabit faz üzerindenmobil faz taşımak için baskı eklemek için kullanılır )pompalar ve kaydetmek vekromatogram basacaktırbilgisayar . Istenen veri toplamak içinuygun programlar seçin . Enjeksiyon portunanumune enjekte edilir. Basınca bir göz atın . Sütunun her tür bir maksimum basınç vardır; Bu aşmaması veya ayırma gerçekleşmez . Kromatogram yazdırın veanaliz sonuçları. Her çalışma sonunda , bu blokajları oluşturabilir oluşumunu önlemek içinenjeksiyon portu , dışarı atılması için önemlidir .
Türleri
Hidrofilik etkileşim kromatografisi gümrüklü polar kullanır hareketsiz faz ve polarite göre molekülleri ayırmak için bir polar olmayan , suyla karışabilir bir mobil faz . Bu teknik atomunun birbirine bağlanmış olan , aynı moleküler formüle sahip , yapısal izomerler (molekülleri ayırmak için bir polar bir durağan fazı ve bir polar olmayan , susuz bir mobil fazı kullanan tek chromatogram.Normal faz kromatografisinde , asidik, bazik ve nötr örnekleri ayrı yeteneğine sahiptir farklı yolu ) . Ters fazlı kromatografi HPLC en yaygın olarak kullanılan türüdür. Bu, bir polar olmayan bir durağan fazı ve bir sulu biraz polar mobil fazı kullanır. Bu yöntem, genel olarak release.Size dışlama kromatografisi büyüklüklerine göre molekülleri ayıran önce ilaç nitelemek için ilaç şirketleri tarafından kullanılan ve aynı zamanda çözünen içindeki iyonların ve yüklü siteler arasındaçekim dayanır proteins.Ion değiştirme kromatografisi yapısını belirlemek sabit faz üzerinde bağlanmış .
kullanır
HPLC çeşitli uygulamalarda yararlıdır. Bu yeni ilaç araştırma hem de mevcut olanları arındırılmasında faydalı olan farmasötik maddeler , analiz etmek için kullanılabilir. Ayrıca, biyolojik sıvıları , böcek ilaçları , patlayıcı madde ve diğer maddeleri analiz etmek için kullanılır . O , biyomedikal biyokimyasal ve ilaç araştırmaları için popüler bir teknik olmasına rağmen , aynı zamandakozmetik , gıda , çevre ve enerji sektörlerinde kullanılmaktadır .