kontrol
veantikor hazırlayın . Antikordoğru ana büyüdü , ve test edilmektedir (izoformuna veya ek varyant olarak da bilinir )proteinintam sürümü ile reaksiyona girerek doğrulayın . Bir pipet kullanarak , dikkatli bir ' kişisel hisse senedi ' olarak bir 10 mikrolitre bu bölümünü ve etiket almaya .
Antikor sadece çok küçük miktarlar varsa , bu adımı atlayın .
Kişisel bir stok tutulması Buorijinal stok çapraz bulaşmayı önler gibi antikor tüm laboratuarlarda rutin bir uygulamadır. Işıktan korunan bir mikrofüj tüpüne veya direk güneş ışığından korunması için bir alüminyum folyo ile sarılmış normal bir mikrofüj tüpü içine , bu dağıtın .
, Tercihen hava geçirmez bir kapak ile bir Esky olarak , buz üzerinde , bu tüp edin , tekrar antikor yok edebilir , ışık en aza indirmek için . Orijinal hisse senedi konsantrasyon not edin ( örneğin, mililitrede 100 Ünite , böylece 1 mikrolitre başına miligram ve )antikorun adı ve ne varsa , tampon de (örneğin , serum , serum fizyolojik içinde sulandırılır dahiltüp , ya da su , vs.)
2P da antikor, bir seyreltici olarak da bilinen seyreltme tampon çözeltisi hazırlayın. Emin , buantikor ve kullanılanprosedür immünohistokimya ile uyumlu hale getirmek için kontrol , örneğin, herhangi bir floresan belirsiz veya takip eden bir ikinci antikor etiketleme inhibe olmamalıdır. % 1 Triton- X100 ,% 10 fetal dana serumu ve% 0.2 sodyum azid ile 1X fosfat tamponlu tuzlu su karıştırılarak bir standart immünohistokimya seyreltme (aynı zamanda bloke edici tampon ) sağlayın .
3
titre bir antikor. (Örneğin, mikrolitre başına mikrogram olarak yoğunlaşma birimleri olarak ifade edilir) kişisel stok antikorile belirli bir konsantrasyonda , 10 mikrogram antikor elde etmek için gereken antikoru hacmini belirler.
Hacmi pipetleme bir seyreltme serisi ayarlama 2 antikor sulandırıcı 100 mikrolitre (örneğin X mikrolitre ) , mikrogramı ve aşağı yukarı pipetleme ve iyice karıştırın eşdeğerdir . Bu başlangıç seyreltmeden, aynı X mikrolitre almak ve seyrelticinin bir sonraki 100 mikrolitre bu ekleyin. 8-10 seyreltilerde ( veya dizi ) kadar bu işlemi tekrarlayın oluşur .
Son tüp nedenledüşük konsantrasyon ve" doyurucu " olacaktır Deney sırasında sinyalinin en yüksek düzeyde konsantrasyonu üretecektir . Çok fazla sinyal üretilir böylece Ancak, ideal bir konsantrasyon plan hatalara neden olabilir ki, bu biraz daha konsantre olur.
Yeni seyreltilmiş konsantrasyonlarda doğrutüpleri etiketleyin.