Katalaz bir biyolojik ( organik) katalizör olduğunu. Bu enzim, bilinen en güçlü katalizörlerin biri olan ve insan vücudu üzerinde yararlı etkileri vardır ve yaşam için çok önemlidir. Katalaz, hidrojen peroksidin parçalanmasını hızlandırmak bir katalizör olarak hareket eder. Hidrojen peroksit kaldırılmaz ise hücrelere zehirli olan bir metabolik yan ürünü . Katalaz su ve oksijene hidrojen peroksit parçalayarak yardımcı olur. Katalaz , aynı zamanda, fenoller , formik asit , formaldehit ve alkol gibi diğer toksinler bir oksitleyici yardımcı olur. Bu ne 300 uL substrat
fosfat tamponu içinde kromojen iki 110 mL
ihtiyaç - 30% hidrojen peroksit
400 μL.HRP - fosfat tampon maddesi
60 mL fosfat içinde yabanturpu peroksidaz fosfat tamponunun of Two 30 ml substrat seyreltici fosfat tamponunun of Two 30 mL stop ayıracı 'de 250 mL numune seyreltici surfaktan tampon - sodyum Azide
İki küçük şişeler 160 U /şişe standart katalaz
Spektrofotometre
10 mcL ayarlanabilir pipetler 1 cm yol uzunluğu -
spektrofotometrik küvetler kapaklı 1.5 ml polipropilen mikrotüpleri
Deney tüpleri - 12X75 milimetre ( 2.5 mL her biri )
Timer
Deiyonize su
Daha Talimatları 1. 50 mililitre (ml ) cam şişelerkatalaz konsantrasyonlarda deiyonize su 200 mikrolitre ( ul ) ekleyerek ölçüm olacak katalazstok hazırlayın
göster
. Katalaz konsantrasyon seviyesi, mililitre başına 160 birim ( U /ml ) az olmalıdır.
2P tüpler içinde seyreltilmiştir katalaz 30 uL ekleyin . Her tüpe - (10mm H2O2 hidrojen peroksit) , substratın 500 uL ekleyin . Onunla çalışırkenhidrojen peroksit sıçrama için dikkatli olun .
3
oda sıcaklığında bir dakika boyunca her tüp inkübe .
4.
500 & mu ekle , her bir şişeye, reaktif L . Her şişeyi kap ve yukarı ve aşağışişeyi ters çevirerek karıştırın . Karışımı girdap etmeyin , şişeyi sallayın ya da bir nesne ile karıştırın .
5
deney tüpleri içine her reaksiyon karışımı 20 mcL ekleyin . Her bir test tüpüneHRP maddesi 2 mililitre ekleyin . Yine , deney tüpleri birkaç kez ters yüz edilerekçözelti karıştırılır.
6
, tekrar oda sıcaklığında 10 dakika için bu kez çözelti inkübe edin.
7
absorbansını bir spektrofotometre ile çözeltinin seviyesi. Spektrofotometre önlemler maddeler mevcut ve ne konsantrasyonları tam olarak ne olduğunu belirlemek için dalga boylarını yanar. Bu yöntem, katalaz konsantrasyonları doğru bir okuma verecektir. Bu bilgiler , insan vücudunda doğal olarak gerçekleşir , bu deneyde olduğu gibi , ve benzeri gibi, hidrojen peroksit ile katalaz etkileşimi bağlamında yararlıdır.