Geliştirilmiş hassasiyet:
- Dolaylı immünofloresansta ikincil antikorların kullanılması sinyali güçlendirir ve duyarlılığın artmasına neden olur. İkincil antikorlar tipik olarak birden fazla floresan moleküle konjuge edilir ve hedef antijene bağlanan küçük miktarlardaki birincil antikorların bile tespit edilmesine olanak tanır.
Belirlilik:
- Dolaylı yöntem, birincil antikorların hücresel bileşenlere spesifik olmayan bağlanma potansiyelini azaltır. Bunun nedeni, ikincil antikorların birincil antikorlara karşı üretilmesi ve bunların yalnızca hedef antijene bağlı birincil antikorları spesifik olarak tanımasını ve onlara bağlanmasını sağlamasıdır.
Çok yönlülük:
- Dolaylı immünofloresan, farklı floresan boyalara konjuge edilmiş çeşitli ikincil antikorların kullanımına izin vererek deneysel tasarımda çok yönlülük sağlar. Araştırmacılar, istenen emisyon dalga boyuna göre uygun ikincil antikoru seçebilir, bu da çoklu analize ve birden fazla antijenin eşzamanlı tespitine olanak tanır.
Sinyal güçlendirme:
- Dolaylı immünofloresan, birden fazla floresan moleküle konjuge edilmiş ikincil antikorların kullanımı yoluyla sinyal amplifikasyonunu mümkün kılar. Bu amplifikasyon, floresan sinyalin parlaklığını arttırır ve zayıf şekilde eksprese edilen antijenlerin tespitini kolaylaştırır.
Maliyet etkinliği:
- Dolaylı immünfloresan, doğrudan immünfloresanla karşılaştırıldığında daha uygun maliyetli olabilir. Birincil antikorların üretimi genellikle daha fazla kaynak gerektirirken ikincil antikorlar daha kolay üretilebilir ve elde edilebilir, bu da potansiyel olarak testin genel maliyetini azaltır.
Çeşitli örnek türlerine uygulanabilirlik:
- Doğrudan immünofloresan tipik olarak antikorun, antikorun bağlanma özelliklerini ve özgüllüğünü değiştirebilen bir florofor ile etiketlenmesini içerir. Dolaylı immünofloresan, yalnızca ikincil antikorun etiketlenmesine izin vererek birincil antikorun etkileşimlerini etkileme riskini azaltır.
Sinyal-gürültü oranı:
- Dolaylı immünfloresan, doğrudan immünfloresanla karşılaştırıldığında daha iyi bir sinyal-gürültü oranı sağlar. İkincil antikorların kullanımı, birincil antikorun hücresel bileşenlere spesifik olmayan bağlanmasından kaynaklanabilecek arka plan floresansının ortadan kaldırılmasına olanak tanır.