Hücre kültürü içeren birçok biyolojik deneylerde , kritik bir adım hücreleri hayatta olan ve numune ölü hangi bilerek içerir

Nasıl Hücre Canlılık Tedbir . Boya dışlama hücre canlılığı ölçümen popüler yöntemdir. Boya dışlama canlı hücreleri böylece ölü hücrelerisitoplazma içineboya absorbe , sağlam zarlar ve ölü hücreleri yok içerdiğiniteorisine dayanmaktadır . Orada farklı boyalar ve protokoller ve seçtiğinizyöntemler maliyet , duyarlılık , kolaylığı ve prosedür uzunluğuna dayalı olmalıdır . Tripan mavisi prosedür beş ila 10 dakika içinde yapılabilir ve reaktif boya sadece miktarı maliyeti olabilir, çünkü hücre canlılığını ölçmek için kullanılan bir boyadır. İhtiyacınız olacak şeyler % 0.4 mavisi ile ayıracı
Fosfat Işık mikroskop
< br
salin ( PBS ) tamponlu
MİKROPİPETİ
Pipet uçları
hemasitometrede
Kapak kayma > Daha Talimatları göster 1 ölçme konumhücre pelet elde

.
2

süspanse PBS içindehücre pelet yaklaşık 5 x 105 hücre /ml almak için . Hücreler, serumsuz ortamda zaman canlılığı ölçümleri daha doğru olduğu için PBS kullanılır; serum proteinleri ayrıca leke ve size yanıltıcı sonuçlar verebilir .
3

1-2 seyreltme ( örnek elde etmek için % 0.4 tripan mavisi eşit parçaya PBS içinde hücre süspansiyonu eşit parçalarını ekle : . 100 Mavitripanla 100 ul hücre ) ul ve aşağı yukarı pipetleme karıştırın
4

, oda sıcaklığında en az üç dakika boyunca karışımı inkübe . Hücreler yaklaşık beş dakika sonra sayılır ise , canlılığı nedeniyle hücre ölümü yanlış olacaktır .
5

zaten yerindekapak kayma ile ,hücre süspansiyonu ile bir hemasitometre sayacının her tarafı doldurun. Tipik olarak, her tarafı 10 ila 20 ul alacaktır .
6

ışık mikroskobusahnedeHemasitometre yerleştirin vehücrelerin üzerine odaklanacaktır .
7.

Her tarafı arasında hemasitometre birden fazla kare içerir. Hemasitometre bir kare içinde hücrelerin toplam sayısı. Sonra aynı meydanda , ayrıcansız ( mavi ) sayısını ve canlı ( net ) hücreleri saymak .
8.

canlı hücrelerinsayısını bölerekmeydanda canlı hücrelerinyüzdesini hesaplayın 100 ile toplam hücre ve çarparaksayısına göre . ortalama bir canlılık ölçümü elde etmekhemasitometre birden kareler için bunu yapın .