sodyum dodecylsulfonate (SDS ) gibi bir deterjan , bir protein veya nükleik asit ilave edildiğinde , deterjan ile ilişkilendirmek ve (denatüre ) proteinler ve nükleik asit ortaya çıkacak . Proteinlerin denatürasyonu daha kolay elektroforezinde moleküler ağırlığı belirlemek için yapar. Gerekli numune miktarı, proteinler için örnek bandı başına tipik haliyle 100-500 nanogram ve yaklaşık 25-40 mikrolitrelik bir toplam hacim içinde nükleik asitler için bant başına 5-100 ng olduğunu.
Jeller
tipik poliakrilamidin yapılan veya agaroz , hazırlanmış veya bu proteinleri ayırmak için satın alınabilir bir jel ,
. Jel, bir çok jelatin gibi. Çoğunlukla su, ama kullanım için yeterince sağlam. Jeller, pH'ı kontrol etmek için tampon içerir. Jel, çok ince ( 1-2 mm) ve dikdörtgen şeklindedir. Bir tarafı eksik dişlerin bir sürü bir tarak gibi görünüyor. Boşluklar kuyular olarak adlandırılır.
Örnek Yükleme
tampon maddesi ve denatüre edilmiş proteinler ile bir bölme içinde bir yerlerdejel oyuklara ilave edilir. Bilinen moleküler ağırlıklarına numuneleri dış oyuklara ilave edilir. Jeller poliakrilamidin değişen miktarlarda ile yapılır. Daha yüksek jel kuvveti (yüzde 12) daha yüksek molekül ağırlıklı moleküller için kullanılır ise düşük bir jel kuvveti (yüzde 4 ), yüksek molekül ağırlıklı moleküllerin ayrılması için daha iyidir. Bir gradyan jel jel gücü değişir ve bazı çözünürlükkaybı ile proteinlerin geniş bir ayırabilir.
Electromigration
yüksek bir elektrik voltajının uygulanması ile, denatüre proteinlerin kuyunun altına doğru hareket eder. Daha yüksekproteinağırlığı , yavaş hareket eder. Elektrik kapatıldığında ,proteinler hareketli durdurmak . Birbölmedenjel kaldırır ve boya ile bir çanak içinde sallanır. Gibi etidyum bromür gibi floresan boyalar nükleik asitler için kullanılır ise bu gibi Coomassie mavi ya da metal boyaları gibi organik boyalar, leke proteinleri için kullanılır. Sonuçların
Analiz
ile aşırı leke çıkarma , bir karışımları merdivenler gibi görünüyorsun bantlar ayırmak görebilirsiniz . Bantlarınkonumu her bir bantta numunenin molekül ağırlığını belirlemek için standartlar ile hareketmesafesi ile karşılaştırılır. Jel alkol ile dehidrate ve kaydedilebilir böylece kurutulmuş olabilir . Bandın sonra, renk yoğunluğu her bir banttaprotein konsantrasyonunu belirlemek için ölçülebilir.
Protokol Development
standart protokoller ile birlikte çalışmak için uygun olan iyi bilinen proteinler . Bir araştırmacı bilmediğiniz bir numune ile çalışıyorsa ,jel kuvveti , tampon tipi , tampon pH , gerilim , koşmak zamanı ve leke tümiyi ayırma ve sinyal elde etmek için optimize edilmesi gerekebilir .
protokoller