Yıkama hücreleri kirleri çıkarmak için serum fizyolojik ( PBS) . Tris ve glisin içeren tamponlar biyotinlasyonu ile yarışacak ve kaçınılmalıdır . İç proteinlerin biyotinile önlemek için,etiketleme 4 santigrat derece ya da azid varlığında gerçekleştirilebilir. PBS ve çözünür biotin içinde süspanse edin hücreleri , sülfo- NHS- LC -biotin .
Etiketleme Yapışık hücreler
yıkayın , PBS içinde hücreler ve bu sülfo gibi bir ürün ile inkübe -NHS -LC -biotin . Hücreler daha sonra , bir çanak içine kazınmış ve deterjan Triton -X -100 içeren bir tamponda liz edilmiş ve görselleştirme için hazırlanır.
Etiketlenir Hücreler hazırlanması
izlenerek kuluçka , hücreler topak haline santrifüj ve PBS içinde yıkanır. Hücreler PBS içinde yeniden süspansiyon haline getirildi ve IgG sefaroz jel ile saflaştırılır. Bağlanmış protein 100 santigrat dereceye ısıtılmıştır ve yükleme tamponu içinde seyreltilir.
Hücreler görselleştirme
Seyreltilmiş proteinler, sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforez kullanılarak görüntülenebilir (SDS- PAGE)protein ve enzim karışımı , streptavidin -yaban turpu peroksit ile kurutma takip etmektedir. Lekeler, ışık yayan bir kimyasal reaksiyon --- chemiluminescence --- ile görüntülendi . Biyotinilasyonunun Özgünlük çalışmanın altındaprotein antikorlar ile teyit edilebilir .