Hücrelerhücre içi proteinlerinistikrarı korumak için sabit olmalıdır . Fiksatif bir dizi gibi formaldehid veya buz soğukluğunda aseton olarak kullanılabilir . Fiksasyonu takiben hücre zarı antikor, hücreye girmesine izin vermek için permealized edilmesi gerekmektedir. Triton veya NP -40 gibi deterjanlar ya da buz soğukluğunda metanol hücre zarında delik yapmak için de kullanılabilir.Bloke edici tampon içinde
lekelenmesi
Yıkama hücreleri yüzde 0.5 büyükbaş hayvan serum albümini , fosfat tamponlu tuzlu su, BSA /PBS içinde seyreltilmiştir. Hücreler, spesifik olmayan bağlanmayı azaltmak için blokaj tamponu içerisinde inkübe edilir. Blokaj tamponunda seyreltilmiş primer antikor ekleyin ve bir zaman süresi için optimize edilmiş , oda sıcaklığında inkübe olmaya bırakın. Blokaj tamponu ile yıkayın.
Analiz
30 dakika süre ile , oda sıcaklığında , bir floresan etiket ile etiketlenmiş ikincil antikor , inkübe edin. Tampon engelleme bağlanmamış antikor yıkama hücreleri çıkarmak için . Bir pelet içine ve sonra Spin hücreler PBS içinde tekrar süspansiyon ve sitometresiyle akış analiz .