Yıkama adımlarının gerekli olmasının birkaç nedeni şunlardır:
Bağlanmamış maddelerin uzaklaştırılması: Reaktiflerin veya antikorların eklenmesinden sonraki yıkama adımları, aşırı antikorlar, spesifik olmayan bağlanma molekülleri veya katı faza yakalanmayan veya bağlanmayan reaksiyon bileşenleri gibi bağlanmamış maddelerin uzaklaştırılmasına yardımcı olur. Bu, algılama sinyalinin spesifik olmasını ve arka plan girişiminden arınmış olmasını sağlar.
Çapraz bulaşmanın en aza indirilmesi: Yıkama adımları, numuneler arasındaki çapraz kontaminasyon riskini etkili bir şekilde azaltır. Bu, reaksiyon bileşenlerinin veya kirletici maddelerin bir kuyucuktan diğerine taşınmasını önlediğinden, birden fazla numune aynı anda işlendiğinde özellikle önemlidir. Yıkama, bireysel numune sonuçlarının bütünlüğünün ve doğruluğunun korunmasına yardımcı olur.
Müdahale eden maddelerin etkili bir şekilde uzaklaştırılması: Sonraki adımlara müdahale edebilecek maddelerin uzaklaştırılması için yıkama gereklidir. Örneğin, bir ELISA testinde yıkama, bağlanmamış konjuge-antikor komplekslerinin ortadan kaldırılmasına yardımcı olur, böylece arka planda renk gelişimini azaltır ve kolorimetrik reaksiyonun özgüllüğünü arttırır. PCR'de yıkama, önceki amplifikasyon döngülerinden nükleotidleri, primerleri ve polimerazları uzaklaştırır, bulaşma kontaminasyonu riskini en aza indirir ve bir sonraki döngüde doğru amplifikasyonu garanti eder.
Standartlaştırma ve tekrarlanabilirlik: Araştırmacılar, standartlaştırılmış yıkama prosedürlerini takip ederek, koşulların deneyler arasında ve farklı laboratuvarlar arasında tutarlı olmasını sağlar. Bu tutarlılık, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kritik öneme sahiptir.
Yıkama prosedürü, yıkama tamponunu dağıtmak ve aspire etmek için çok kanallı bir pipet veya otomatik bir plaka yıkayıcının kullanılmasını içerebilir. Yıkama tamponu tipik olarak tahlilde kullanılan orijinal tamponun bileşimine benzeyen ancak herhangi bir reaksiyon bileşeni içermeyen tamponlu bir salin solüsyonudur.
Aşırı yıkama olmadan yeterli yıkama çok önemlidir. Aşırı yıkama, katı faza bağlı temel bileşenlerin kaybına neden olabilir ve testin hassasiyetini etkileyebilir. Bu nedenle yıkama protokolleri, hareketsizleştirilmiş moleküllerin veya ilgilenilen analitlerin bütünlüğünü korurken, istenmeyen maddelerin en iyi şekilde uzaklaştırılmasını sağlamak için dikkatli bir şekilde tasarlanmıştır.