üzerinden agaroz tozu 0,7 gram tartılır ve sonra bir büyük ( 250 ml ) içine yerleştirmek konik şişesi hazırlanıyor .
2
100ml ekle bir 1X ( düzenli gücü ) tamponu yaklaşık biri için bir bunsen beki kullanarakagaroz tozu .
3
Mikrodalga veya ısı içerenerlene ( TAE , TBE , SB veya LB tampon ) çözümün kadar dakika açık olur veagaroz çözülmüş oldu.
4.
ısı kaynağındanşişeyi çıkarın ve 55 ila 60 santigrat dereceye kadar soğumasını bekleyin.
5
uygun büyüklükte bir pipet , genellikle 1 ml kullanılarak agaroz soğutulmuş çözeltiye etidyum bromid 1 uL ( mikrolitre ) ilave edin. Karıştırmak içinçözüm girdap .
6
bu süreçte hiçbir kabarcık oluşumu yoktur sağlanması ,jel tepsisine yavaşçajel dökün . Jel tepsi ile hiçbir iyi sağlanan baraj varsa ,
7
jel içine dikkatle elektroforez tarak yerleştirin . Onları oluşturmak için maskeleme bandı sağlam bir konuma sağlanması vedoğru yönde kullanın . Elektroforez tarak sahip oldukları dişlerinsayısına büyük ölçüde değişebilir . Jel yaklaşık olarak 25 dakika süre ile ayarlamak için izin
8
agaorse çözeltisi hazırlamak için kullanılan aynı tampon maddesi içindejel daldırın - . Bu durumda, bir 1X tampon . Tampon çalışan kadar 5 mljel daldırın .
Hazırlama ve Analiz içinAgaroz Jel içine DNA Yükleniyor 10 mcL
9
Transferi 5
taze tüplerine kendi reaksiyon tüpleri , numune ( ler ) . Eğer tüm reaksiyon karışımı kullanmak isteyen durumunda, yeni bir boru gerekli değildir.
10 yükleme için DNA örneği içeren taze numune tüplerin her birine 0.2X yükleme tamponu ekleyin p. ' br> 11
Eğerjel kırmak ya dajelalt vejel tepsi arasında herhangi bir boşluk yaratmak değil sağlanması , yavaş yavaşelektroforez tarağı çıkarın .
12
beş ekle
uygun bir DNA marker 12 uL iyielektroforez tarak tarafından oluşturulan birinci . Bir DNA işaretleyici uygun olup olmadığınıkalan kuyuların içine 13
Yüksüz
16
ve jel bir fotoğrafını çekmek için güçlü bir makinenin içine görsel kimlik , ya da bir yer için UV odasında ya yerleştirin .
.
.
.
.
boyutu ekseni üzerinde .
. Eğer örneklem bekliyoruzparçalarınınbüyüklüğüne bağlı numune beş ila 10 mcL bağlı ve eşit eklemek nihai kuyuya aynı DNA marker miktarı.
14odası içine doğru yuva içine teller takarakelektroforez odasının içine elektrotlar koyun ve 50-150 V
jeljel odasındanjel çıkarın
Sonuçlarının 1-4 saat .
Analiz boyunca çalışmasına izin verin
17. kuyulardan göçbelirteçleri mesafeyi ölçün
18 yarılogaritmik grafik kağıt üzerindebantlarınbüyüklüğü karşısındamesafeleri çiziniz ve en uygun çizgi çizin
19 sizin bilinmeyen bantlarımesafeleri hesaplayın
20 kadar iyi uyumçizgi karşılar sizin bilinmeyen bantları ile seyahatmesafeden bir çizgi çizerek bilinmeyen bantlarıboyutlarını tahmin
21 bu buluşma noktasında başka bir çizgi çizin