yakalama antikor dışarı Damper ve 200 uL PT tamponu ile iki kez yıkayın . Oyuk başına , bloke edici tampon içinde 200 uL (PB ya da yüzde 5 kaymağı alınmış süt ) eklenir. 4 derecede bir gece boyunca çalkalanarak iki saat için inkübe yerde C.
3
blokaj tamponu üzerinden Damper ve 200 uL PT tamponu ile 4 kez yıkayın. " Prob " ekleme oyuk başına 100 uL ilave PB ya da yüzde 5 yağsız süt içinde çeşitli konsantrasyonlarda protein örnekleri , . Prob çözümler Damper ve 200 uL PT tamponu ile altı kez yıkayın bir saat 4 derece C'de çalkalayarak kuluçkalayın.
4
(HRP ile konjüge edilmiş antikor ) algılama antikor ekleyin PB tamponu içinde 1:4000 seyreltilmiş veya de örnek başına 50 uL ilave yüzde 5 kaymaklı süt ( yüzde 0.05 Tween- 20 ihtiva eden bir ya da ) . 4 ° C de çalkalanarak bir saat 30 dakika boyunca inkübe
5 algılama antikoru çözüm Damper ve 1x 200 uL ile iki kez yıkayarak ve ardından , oyuk başına 200 uL PT tamponu ile 6 kez yıkayın
PBS (fosfat tamponlu tuzlu su) . PBS dışarı dökümü ve oyuk başına saptama reaktif maddesi 100 uL ( HRP için , 1:01 ile TMB alt tabakasını ve peroksid karıştırılmasıyla taze karıştırılmış TMB reaktif kullanın). Sıra çalkalanarak oda sıcaklığında 15 dakika boyunca inkübe edin.
TMB ve HRP kullanırken: Son olarak, TBM , reaksiyonun sönmesi için 1 M H3PO4 oyuk başına 100 uL ( fosforik asit ) ekleyin
resimleri plaka okuyucu kullanarak numune analizi , bir 96 oyuklu plaka okuyucu . . ( HRP ve TMB için , çoğu okuyucu üzerinde" ELISA Uç Nokta Deneyi " şablonu mevcut kullanın . )