.
2
süspanse PBS içindehücre pelet yaklaşık 5 x 105 hücre /ml almak için . Hücreler, serumsuz ortamda zaman canlılığı ölçümleri daha doğru olduğu için PBS kullanılır; serum proteinleri ayrıca leke ve size yanıltıcı sonuçlar verebilir .
3
1-2 seyreltme ( örnek elde etmek için % 0.4 tripan mavisi eşit parçaya PBS içinde hücre süspansiyonu eşit parçalarını ekle : . 100 Mavitripanla 100 ul hücre ) ul ve aşağı yukarı pipetleme karıştırın
4
, oda sıcaklığında en az üç dakika boyunca karışımı inkübe . Hücreler yaklaşık beş dakika sonra sayılır ise , canlılığı nedeniyle hücre ölümü yanlış olacaktır .
5
zaten yerindekapak kayma ile ,hücre süspansiyonu ile bir hemasitometre sayacının her tarafı doldurun. Tipik olarak, her tarafı 10 ila 20 ul alacaktır .
6
ışık mikroskobusahnedeHemasitometre yerleştirin vehücrelerin üzerine odaklanacaktır .
7.
Her tarafı arasında hemasitometre birden fazla kare içerir. Hemasitometre bir kare içinde hücrelerin toplam sayısı. Sonra aynı meydanda , ayrıcansız ( mavi ) sayısını ve canlı ( net ) hücreleri saymak .
8.
canlı hücrelerinsayısını bölerekmeydanda canlı hücrelerinyüzdesini hesaplayın 100 ile toplam hücre ve çarparaksayısına göre . ortalama bir canlılık ölçümü elde etmekhemasitometre birden kareler için bunu yapın .