bazı hücreler petri kutularının tabanları için uygun ya da bir sıvı içinde süspansiyon haline kalır. Hücreler, bitki ya da hayvan kaynaklı olabilir. Dokusu kültürlerinde genellikle kullanılan hücreler, ya da kültür içinde muhafaza edilmiş bir hücre hattının , bir organizma tarafından doğrudan hasat edilmiştir , yani birincil hücreler olabilir. Hücre hatları , genellikle kanser hücreleri , ve deneyler planlama veya sözlü bu dikkate alınmalıdır.
Yavaşça
Yapışık hücreler tarafından kabul edilmesi için bunların bir petri kaldırılır Hücreler tedavi kazıma ya da bir proteaz ile , genel olarak tripsin ve EDTA . Kazıma birçok hücreleri öldürür ve hücre lizatlarını ( sıvı analizi için hücre içeriğinin preparatları ) veya hazırlarken sadece kullanılmalıdır tripsin /EDTA kesinlikle kaçınılmalıdır zaman .
Trypsinizingçanak hücreleri uygunproteinleri de yok ancak hücrenin membran üzerine çok başka proteinler de. Hücreler topu yukarı veçanak ile bir bağı yeniden kurmak için , genellikle bir gecede , biraz zaman alabilir . 25cm2 bir şişe için yaklaşık 1 mL - - tripsin az miktarda eklenmesi kaplamak için beş saniye ya da daha aztek tabaka için sallanan şişe ve daha sonra dökülen veya fazla tripsin aspiretek tabaka maruz kaldığı tripsin miktarını azaltacaktır . ,Hücreleriyemeğindibini kapalı slayt
sonra .Hücreler tripsinizasyon sırasındainkübatör dinlenelim serumu ile medya eklemek ve yukarı ve hafifçepipet aşağı Lisatı aspire . Eğer kümeleri parçalayın ve hatta süspansiyon elde etmek için birkaç kez aşağı yukarı pipetleme yapmayın ve biraz olarak medyaçanak kalmasını sağlar.
Pipet içine baloncuklar emmek etmeyin . Ayrıca , kuvvetlice karıştırın veyahücre süspansiyonu vorteks yok ; hücreler bu balled - up durumda çok kırılgan .
Isı inaktive veya değil Inactivate Isı için
hücre kültürü teknikleri kendi bebeklik vardı , zaman fetal sığır serumu ( FBS) , bağışıklık sistemi proteinleri hücreler lize tamamlayıcı proteinleri ihtiva ettiği biliniyordu. Tamamlayıcı proteinler , hücre kültüründe istenmemektedir. 30 dakika boyunca 56 santigrat derece ısı inaktive FBS inaktif kompleman proteinlerini verecek. 37 dereceye kadar FBS ısıtması da kompleman proteinleri inaktive yeterli C .
Ilk günlerde , ısı inaktive FBS da mikoplazma ve diğer kirlilikleri öldürdü. Zamanda, filtre sterilizasyon 0.45um filtre ile gerçekleştirildi. Bugün, 0.1um ya da 0.04um filtrelerden FBS ortamı ve sterilize filtre. Hayır mikoplazma bu kayacak
Bu bize Inactivate ısıtmak için olsun veya olmasınbir soru bırakır
Isı inaktivasyonuFBS tüm bileşenlerini parçalayan - . . Gibi vitaminler, amino asitler ve büyüme faktörleri gibi - . Eğer büyüyen yavaş ya da titiz hücre hattı ile çalışıyorsanız muhtemelen bazı titiz hücre hatları
içineşiğin altında , sadece sizin FBS sterilize filtre düşünün . Siz bu hücrelerinsağlamlığını artırır bulabilirsiniz .